Dans le contrôle aérien, la séparation est la distance entre deux aéronefs, deux niveaux, deux trajectoires. C'est un moyen utilisé par le contrôle aérien pour réduire le risque de collisions et les accidents dus aux turbulences de sillage. En cas de perte de séparation on parle de conflit.

Avant la nouvelle réglementation de la circulation aérienne de 2006, une séparation assurée par le contrôle aérien était appelée espacement.